ATP测定试剂盒使用中常见问题解答
1.Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
答：荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说Luminometer是检测化学发光的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2.可以进行荧光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的ATP检测？
答：是。荧光素酶报告基因的检测原理和本ATP检测试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定，并且可以选择相同的测定参数，例如检测前等待时间为2秒，检测时间为10秒等。
3.为什么测试出来的数值会有小幅波动？
答：由于本身试剂发出的光的多少是随机的，发光的方向基本上也是散射的，而且检测仪器的测光效率可能也会随着温度的变化而改变，所以ATP荧光检测一般允许±5％的误差。
ATP试剂盒使用说明：
1.样品测定的准备：
如果是贴壁细胞，按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例(即相当于细胞培养液量2毫升的1/10)加入裂解液；
如果是悬浮细胞，离心收集细胞后，也按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例加入裂解液；
如果是组织样品，可以加入适当比例的裂解液后匀浆，充分匀浆以确保组织可以被完全裂解。样品裂解需在4℃或冰上操作。裂解后4℃12000g离心5-10分钟，取上清，用于后续的测定。
2.标准曲线测定的准备：
冰浴上溶解待用试剂，把ATP标准溶液用超纯水稀释成适当的浓度梯度。具体的浓度需根据样品中ATP的浓度而定。一共需稀释5个梯度。
3.ATP浓度的测定：
(1)加100微升ATP检测工作液到检测孔或检测管内。室温放置3-5分钟，以使本底性的ATP全部被消耗掉，从而降低本底。可以一次性把10-20个检测孔或检测管分别加上100微升ATP检测工作液，从而节省时间。注意由于一般的荧光检测仪和液闪都是单道测量，所以在平行性和ATP含量较少的情况下，每次只加入一个检测孔的ATP样品，测完一个再测另一个，不要同时把样品都加入到测试的检测孔中。
(2)在检测孔或检测管内加上10微升样品或标准品，迅速用枪(微量移液器)混匀，同时要保证用枪吸打的次数和时间基本一致，立即用luminometer或液闪仪测定RLU值或CPM。(如果样品中的ATP浓度比较低则可以加20微升样品或设法提高样品中的ATP浓度（如仍然无示数请用标准ATP测试或与公司技术人员取得联系），如果样品中ATP浓度比较高则可以加较小体积的样品，同时标准品的也需要使用相同的体积。如果样品中ATP的浓度特别高，可以用Milli-Q级的纯水或重蒸水稀释样品后再测定，这样ATP标准液也要作类似于样品的稀释，保证检测时标准品中ATP的含量和样品基本一致。本试剂盒在加10微升样品时，大致在0.1nmol/L-100nmol/L的浓度范围内有很好的线性关系。
(3)根据标准曲线计算出样品中ATP的浓度。
ATP测定试剂盒
产品简介：
ATP检测试剂盒(ATP Assay Kit)可以用于检测普通溶液中或细胞或组织内的ATP(adenosine 5’-triphosphate)水平。ATP，作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。
本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)催化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比。这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。本检测试剂盒最低可以检测浓度低达1fmol/L的ATP（小于500细菌细胞）。而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1-1μmol/L，一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10nmol/mg蛋白。检测细胞或组织内ATP浓度时，用本试剂盒提供的裂解液裂解后即可以测定ATP浓度。本试剂盒方便快捷，通常10-20个样品可以在30-60分钟内测定完毕。本试剂盒可以检测100个样品。
注意事项：
1）ATP检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得较好的使用效果，冻融的次数不宜超过3次。ATP检测试剂可以分装成小份1ml一份，最好一次用完，不宜冻存后再使用。
2）ATP，特别是裂解后样品中的ATP在室温不太稳定，需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以稳定长达6小时。
3）ATP检测裂解液5×浓缩 |